脉冲电泳辅助农杆菌介导的植物转基因方法及其装置[发明]

成果编号：29032

价格：面议

完成单位：南京晓庄学院

单位类别：其他高校

完成时间：2018年

成熟程度：小批量生产阶段

服务产业领域：生物技术与医药、现代农业

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发布人：zhangbjiang 离线

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本发明公开了一种脉冲电泳辅助农杆菌介导的植物转基因方法，将包含有目的基因的农杆菌置于电场中后，带负电荷的农杆菌在电场强度下由负极向正极泳动，从而进入植物体内的各个组织器官中。由于细胞壁是以纤维丝为基质组成的，含有许多小孔，在电场作用下农杆菌迁移过程中可通过细胞壁的小孔，并进一步通过细胞膜而进入植物细胞。本发明所采用的方法，极大地提高了基因转化效率，并且缩短了实验周期，特别是对于那些没有建立起再生体系的植物，具有一定的应用价值。

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成果介绍

科技计划：其他：

成果形式：新技术、新工艺

合作方式：技术转让、技术服务

参与活动： 2021年高校院所服务苏北五市产学研合作对接活动首届江苏产学研合作对接大会

专利情况：正在申请 ,其中:发明专利 0 项
已授权专利,其中:发明专利 1 项

成果简介

成果概况

创新要点

一种脉冲电泳辅助农杆菌介导的植物转基因装置，连接在转基因植株受体的根须部和茎叶部的两端；转基因植株受体置于包含有培养溶液的容器中；转基因植株受体的根须顶部全部淹没在培养溶液内；辅助农杆菌介导的植物转基因装置包括微电泳仪和连接在其一端的直径为0.8-1.5毫米的金属管，金属管中设为若干孔，为目的基因进入植物的通道，其插入植株受体的近根部位的维管中，并且其浸泡于培养溶液内；微电泳仪包括正极和负极，其正极通过一根总导线和若干根分流导线组成的正极导线连接在植株受体的叶、茎和生长点上，其负极通过负极导线穿过金属管连接在培养溶液内根须部中间。本发明的辅助农杆菌介导的植物转基因装置，在现有的微电泳仪的基础上，将其正极连接在转基因植株受体的茎、叶等若干个生长点，将其负极通过负极导线连接在转基因受体植株的根须部一侧的培养溶液内，并且位于培养溶液位置处的负极导线外还套有金属管，金属管中设有孔道为目的基因进入植物部提供通道。

主要技术指标

1.脉冲电泳辅助农杆菌介导的植物转基因方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一、收集长势良好、根系完整的受体植物苗备用；步骤二、将包含有目的基因的农杆菌溶液在摇床上震荡培养，使其OD值达到0.4-0.8；步骤三、步骤二得到的农杆菌溶液在3300-3800转/分钟的条件下离心1-3分钟，然后用pH为5-5.4的MS0液体培养基重悬，最后往悬浮液中加入100-200μM的乙酰丁香酮，得到转化溶液；步骤四、把步骤一中准备好的带根的受体植物苗插到步骤三中得到的转化溶液中；步骤五、接通电源，当电压为100-150毫伏开始电泳，受体植物在进行电泳时，负极插入受体植物近根端的微管组织中，正极可分流出若干支路，分别插入受体植物上端的茎、叶脉和生长点组织中，电泳持续2-4小时；步骤六、步骤五完成后将受体植物转入MS0固体培养基中，23-27℃下暗培养2-3天,所述MS0培养基为不添加植物激素的MS培养基；步骤七、暗培养后的植株转入添加固体基质的花盆中，并于人工气候室中诱导开花结实；步骤八、从步骤七中得到的植株种子中筛选纯合的阳性转化子，便可得到转基因植物种子。

其他说明

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