一种检测细菌性脑炎病原体的多重PCR试剂盒（专利号:201610296666.5）

成果编号：21748

价格：面议

完成单位：苏州大学

单位类别：211系统院所

完成时间：2019年

成熟程度：试生产阶段

服务产业领域：生物技术与医药

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发布人：孙老师离线

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细菌性脑膜炎（Bacterial Meningitis，BM）是由各种细菌感染引起的脑膜和脑脊髓膜炎症，是一种较为常见的急性严重性中枢神经系统感染性疾病，临床主要症状表现为头痛、发热、呕吐、意识改变、脑膜刺激征。该病多发于婴幼儿，起病急、病情发展迅速，病死率较高，易遗留有严重的后遗症，如听力障碍、癫痫发作、瘫痪、智力低下等。在发达国家，BM 的发病率为1.4~6.0/10万，病死率约为5[%]，发展中国家发病率为其10倍以上，而且具有更高的病死率。目前我国婴幼儿细菌性脑膜炎的病死率高达60[%]，1月龄至15 岁BM 患儿后遗症发生率为22.6[%]，严重影响患者的身心健康。早期、快速和明确的病原体鉴别诊断，和合理的抗菌治疗是降低本病死亡率和致残率的关键。本发明的提供一种检测细菌性脑膜炎病原体的多重PCR试剂盒，用于细菌性脑膜炎六种常见病原体检测，包括：肺炎链球菌、B型链球菌、流感嗜血杆菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和脑膜炎奈瑟菌。

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成果介绍

科技计划：国家级：国家自然科学基金

成果形式：新技术、新产品

合作方式：技术转让、技术开发、技术咨询、技术服务

参与活动：驻苏高校院所苏北五市产学研合作对接活动第七届中国江苏产学研合作大会

专利情况：正在申请 ,其中:发明专利 0 项
已授权专利,其中:发明专利 1 项

成果简介

成果概况

创新要点

（1）本发明公开的检测细菌性脑膜炎病原体的多重PCR试剂盒，可同时检测六种常见致病菌，比如肺炎链球菌、B型链球菌、流感嗜血杆菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和脑膜炎奈瑟菌，不仅可以节约试剂使用量和降低检测成本，同时提高了检测效率，具有灵敏度高，经济、快速、操作简单等优点；（2）本发明公开的试剂盒进行检测时，嵌合引物浓度低至10μM/每条，公共引物浓度为2000μM；降低嵌合引物的浓度有利于加入更多对嵌合引物，提高多重PCR检测通量；采用单条公共引物且较短，有利于减少二聚体的形成，高浓度可以放大特异性产物的量，进而提高敏感性；（3）本发明公开的试剂盒采用一个PCR反应中的两步退火温度法，前10个循环扩增采用高退火温度（63.5℃）有利于嵌合引物的特异性结合，减少非特异性产物；后25个循环扩增低退火温度（55℃）使公共引物发挥放大作用；中间额外增加3 min延伸，有利于为公共引物获得足够的模板。（4）本发明公开的试剂盒中，公共引物与每条多重PCR特异引物的5 末端连接，一起构成了嵌合引物；公共引物介导的多重PCR可以降低引物对的浓度，抑制二聚体的形成，从而提高多重PCR的检测通量；通过创造性的设计克服了现有多重PCR体系存在的非特异性扩增、易存在二聚体的缺陷；（5）本发明的多重PCR检测体系特异性高，敏感性高达10拷贝/25µL，单管进行，操作简单，且具有灵敏度高、经济、快速等优点，能用于开发相关的检测试剂盒，具有临床应用价值。

主要技术指标

本发明的提供一种检测细菌性脑膜炎病原体的多重PCR试剂盒，用于细菌性脑膜炎六种常见病原体检测，包括：肺炎链球菌、B型链球菌、流感嗜血杆菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和脑膜炎奈瑟菌，其检测最高敏感性可达10拷贝。

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