一种检测白血病融合基因的多重PCR试剂盒（专利号：201410153342.7）

成果编号：21745

价格：面议

完成单位：苏州大学

单位类别：211系统院所

完成时间：2016年

成熟程度：试生产阶段

服务产业领域：生物技术与医药

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发布人：孙老师离线

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白血病患者的遗传学特征异常复杂多变，包括染色体的易位、缺失、突变、倒位和扩增等，这些染色体易位畸变时大部分情况下会产生新的融合基因，这些融合基因可作为诊断不同类型白血病的分子标志，此外，不同类型的白血病化疗和放疗的治疗方案亦不同。因此，融合基因的检测对白血病的诊断、预后、监测微小残留病和指导用药等具有重要的指导价值，已成为白血病诊断标准最重要的指标之一。 BCR/ABL、PML/RARα、AML1/ETO、E2A/PBX1是四种常见的白血病融合基因，可分为BCR/ABL e1a2、BCR/ABL e13a2、BCR/ABL e14a2、PML/RARα L型、PML/RARα S型、E2A/PBX1和AML1/ETO共7种剪切异构体。其中，约95[%]的慢性粒细胞白血病患者能检测到BCR/ABL融合基因；85[%]以上的急性早幼粒细胞白血病涉及PML/RARα融合基因；而AML1/ETO融合基因是最常见的核型异常之一，在M2亚型急性髓系白血病中约占30[%]-50[%]；E2A/PBX1融合基因见于约3-5[%]的儿童和3[%]的成人B细胞型急性淋巴白血病中，是儿童急性淋巴细胞白血病诊断和治疗中的重要检测指标。基于以上原因，选取了这四种发病率高的白血病融合基因作为本研究的检测靶标，成功研发了多重PCR检测试剂盒。

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成果介绍

科技计划：国家级：国家自然科学基金面上项目

成果形式：新技术、新产品

合作方式：技术转让、技术开发、技术咨询、技术服务

参与活动：驻苏高校院所苏北五市产学研合作对接活动第七届中国江苏产学研合作大会

专利情况：正在申请 ,其中:发明专利 0 项
已授权专利,其中:发明专利 1 项

成果简介

成果概况

创新要点

作为PCR重要衍生技术之一，多重PCR有着诸多优势：(1)高效性，减少操作流程，可同时检测多个基因或片段；(2)经济简便性，可大大节约时间和试剂成本。其可在一次实验中同时检测多种常见白血病融合基因，有力地弥补了染色体核型分析的不足，提高了隐匿性易位染色体的检出率。目前，临床常用白血病分子诊断方法主要以Poul Jorgensen为代表的逆转录多重PCR检测方法，此类方法一般将反应体系分成八管，每管检测不同类型的融合基因且产物片段大小存在明显差异，依据扩增产物所在反应管位置及片段大小判断融合基因类型。由于在同一反应体系中多对引物易发生相互作用，如形成发卡结构、二聚体结构等，从而影响扩增效率，这是分为八管进行检测的主要原因，但这亦同时导致了该类检测方法复杂、繁琐，对操作人员相关专业要求较高，难以推广。本发明的发明目的是提供一种检测常见四种白血病融合基因的多重PCR试剂盒，利用其可检测出BCR-ABL、PML/RARA、AML1/ETO、E2A/PBX1这四种常见白血病融合基因的7个剪切异构体。

主要技术指标

（1）、本发明首次公开了一种检测白血病融合基因的多重PCR试剂盒，可同时检测四种包括7个剪切异构体的白血病发病率最高的几种类型白血病融合基因，不仅可节约试剂使用量和降低检测成本，同时提高了检测效率。（2）、利用本发明公开的试剂盒进行检测时，第一轮PCR反应所加嵌合引物浓度仅需为1 µM/每条，第二轮所加公共引物浓度为10µM；降低嵌合引物浓度有利于加入更多对嵌合引物和提高多重PCR检测通量。（3）、利用本发明公开的多重PCR试剂盒进行常规白血病融合基因检测可避免现有技术中存在的多对引物相互作用，从而影响检测结果的缺陷；本发明的检测敏感性最高可达10拷贝/25µL，并且操作简单，无需分管进行，临床检出率高，具有临床推广应用价值。

其他说明

无

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