科技计划:
成果形式:新工艺
合作方式:技术转让
参与活动:
专利情况:
正在申请 ,其中:发明专利 3 项
已授权专利,其中:发明专利 0 项
成果简介
成果概况
随着我国经济的不断发展,食品种类越来越丰富,而新的食品安全问题亦不断涌现,严重影响了人民群众的生命安全及社会经济的可持续发展。食品中微生物总数的检测是确保食品安全的一个重要检测项目。目前我国普遍采用平板菌落计数检验法进行检测,从采集样品,微生物细胞稀释、涂布、培养到取得结果至少需要24-48小时,因此,难于从生产原料、生产设备层面、物流、销售等方面进行实时有效的监测,造成产品质量下降、资源浪费,食品安全事故频发。
所有生物,包括细菌细胞在内都有数量相对稳定的生物能量物质,三磷酸腺苷(ATP)。早在1884年,Dubois发现将萤火虫研磨后的提取物中存在荧光素和荧光素酶的相互作用,并指出在有氧分子、ATP的条件下,萤火虫荧光素酶可催化荧光素氧化并发出便于灵敏检测的荧光 。且上述反应遵循细胞数越多,ATP能量越高,荧光值越高的线性比例关系。上世纪80年代后,美、英、德、日根据上述原理先后设计生产出各种形式的可付诸使用的细菌总数的快速检测系统系列产品,用于样品中微生物总数的测定,在几分钟内就可获得结果,大大缩短了检测时间。萤火虫荧光素酶是这一检测系统的关键。
创新要点
本项目利用迭代饱和突变技术对萤火虫荧光素酶进行改造,构建获得了高稳定性的萤火虫荧光素酶。
通过对预处理系统的改造,排除了食品中动植物细胞、游离ATP对检测体系的干扰,拓展了ATP检测方法在微生物菌落总数测定方面的应用范围。
主要技术指标
萤火虫荧光素酶比酶活达1010RLU/mg蛋白;
所获得的萤火虫荧光素酶在室温条件下放置数月未见明显失活;
所设计的预处理系统能够有效分离动植物细胞及游离ATP,准确性更高。
其他说明
完成人信息
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